抗體真的是偶聯上磁性熒光編碼微球的嗎？

在熒光編碼微球的偶聯方法中，可以用氨基和羧基的共價偶聯方式，也可以用親和素和生物素的偶聯方式，但還有一種讓抗體連到微球上的方式經常被忽略了，那就是無處不在的物理吸附。

流式熒光編碼微球通常為含有氧化鐵納米粒子的聚苯乙烯微球，表面為各種功能團修飾。長期以來有一個容易忽略的問題，那就是聚苯乙烯表面是疏水的，這種疏水的表面在生理水溶液條件下，能通過疏水相互作用與抗體/抗原等發生物理結合。所以我們在將蛋白偶聯到微球的時候，即使我們采用是某種特定的偶聯方式，但實際上這個物理吸附作用是不可避免的。而事實上，這種物理吸附的方式也是常用的在表面固定生物大分子的一種方式，如著名的JSR公司提供的表面疏水的磁性微球就可以直接通過物理吸附結合抗體。

回到流式熒光法的磁性熒光編碼微球連接蛋白，這種吸附作用會帶來什么影響？我們仔細分析一下，物理吸附是一種不太牢固的固定方式，由總體上較弱的分子間作用力（范德華力）而產生的。它是一個動態的平衡過程，有一部分吸上去，也會有一部分釋放出來。這對于單因子檢測（流式熒光法應該沒太多人會用來測單因子），影響應該不大，不管吸附上的還是釋放出來都是它。但是對于聯合檢測，這種不固定的動態平衡則會導致本該特異性結合的抗原/抗體釋放出來，然后被其它不對應的磁性熒光編碼微球吸附上去，最終會對檢測的特異性和準確性造成很大的干擾。

綜上所述，在選擇微球時，信號值高是一個很重要的參數，但需要思考的是這種高熒光值到底是通過物理吸附還是來自于偶聯的信號，而這些物理吸附會不會影響聯合檢測中的特異性和準確性。